腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit
人調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit
人單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human MCP-3 (Monocyte Chemotactic Protein 3) ELISA Kit
人嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF/CCL11)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human ECF/CCL11 (Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit
人胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human TARC (Thymus Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human MIP-3α (Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit
人二級(jí)淋巴組織趨化因子(SLC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SLC (Secondary Lymphoid Tissue Chemokine) ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human MDC (Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit
人髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human MPIF2 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 2) ELISA Kit
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白4α(MIP4α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human MIP4α (Macrophage Inflammatory Protein 4 Alpha) ELISA Kit
人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human CTACK (Cutaneous T-cell Attracting Chemokine) ELISA Kit
人可溶性CD14分子(sCD14)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit
人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human FcεRII/CD23 (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit